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產(chǎn)品展示
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禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒

描述:禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒適用于禽支氣管炎病毒檢測,可用于臨床禽支氣管炎病毒感染的輔助診斷,但不作確診使用。

更新時間:2024-07-04
產(chǎn)品型號:50T
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
詳情介紹
  一、禽傳染性 支氣管炎病毒檢測試劑盒
  二、通用名稱:禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒(實時熒光PCR法)
  三、包裝規(guī)格 50T/盒
  四、預期用途:
  適用于禽支氣管炎病毒檢測,可用于臨床禽支氣管炎病毒感染的輔助診斷,但不作確診使用。
  五、禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒原理:
  針對禽支氣管炎病毒基因組高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,在反應體系中含禽支氣管炎基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
 
檢驗方法
1. 
試劑準備(試劑準備區(qū))
(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
(2)核算當次實驗所需要的反應數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預留量(1T)+樣本數(shù)
單反液配制表(每份)
RT-PCR反應液
15.0 μL
逆轉(zhuǎn)錄酶
 2.0 μL
Taq酶
 3.0 μL
 (3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
2.樣本準備(樣本處理區(qū))
用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
 在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
4. PCR(PCR擴增區(qū))
(1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,并記錄放置順序。
(2)按下表設置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。

反應體積
25 μL
通道選擇
FAM通道采集禽白血病病毒熒光信號
PCR
反應
條件
步驟
條件
循環(huán)數(shù)
反轉(zhuǎn)錄
    42℃:10分鐘(min)
1
預變性
95℃:3分鐘(min)
1
預擴增
95℃:5秒(s)
5
55℃:40秒(s)
PCR擴增
95℃:5秒(s)
40
55℃:40秒(s)
(此階段結(jié)束時采集熒光信號)
 
注:ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正,設置淬滅基團選擇       None。

   【參考值(參考范圍)】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定:
(1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應對標本進行重復檢測,如重復實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗結(jié)果的解釋】
通道及檢測結(jié)果
標本檢測結(jié)果解釋
FAM
+
標本中檢出禽白血病病毒RNA
-
標本中未檢出禽白血病病毒 RNA

【檢驗方法的局限性】
1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的檢出限shi可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。
2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標】 
產(chǎn)品的檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV值≤5%。
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