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牛輪狀病毒(RV)ELISA試劑盒現貨供應

 發布時間:2019/11/18 點擊量:983

牛輪狀病毒(RV)ELISA試劑盒現貨供應

實驗原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包牛輪狀病毒RV)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、陰性和陽性對照、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛輪狀病毒RV)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判定陰陽性。

樣本處理及要求

1.  血清將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20或-80保存,但應避免反復凍融。
2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20或-80保存,但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

試劑盒組成 

 

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

96

48

陰性對照

0.3mL

0.3mL

陽性對照

0.3mL

0.3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

 

1.嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3.消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4.底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9.不能使用過期產品。

10.如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置

試劑準備

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

1. 陰性對照OD值:小于0.2。

2. 陽性對照OD值:大于0.8。

3、陽性判斷(Cut-Off值):陰性對照OD值+0.15,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性。

 

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