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人堿性磷酸酶(ALP)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

 發布時間:2018/7/30 點擊量:1098

人堿性磷酸酶(ALP)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

本試劑盒用于測定人細胞中堿性磷酸酶(ALP)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人堿性磷酸酶(ALP)水平。用純化的人堿性磷酸

(ALP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入堿性磷酸酶(ALP)

再與HRP 標記的堿性磷酸酶(ALP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗

滌后加底物TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui

的黃色。顏色的深淺和樣品中的堿性磷酸酶(ALP)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定

吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人堿性磷酸酶(ALP)濃度。

人堿性磷酸酶(ALP)酶聯免疫分析試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 7 終止液 6ml×1

2 酶標試劑 6ml×1 8 標準品(240 U/L0.5ml×1

3 酶標包被板 12 孔×8 9 標準品稀釋液 1.5ml×1

4 樣品稀釋液 6ml×1 10 說明書 1

5 顯色劑A 6ml×1 11 封板膜 2

6 顯色劑B 6ml×1/12 密封袋 1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

人堿性磷酸酶(ALP)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

120 U/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

60 U/L 4 號標準品 150μl 5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

30 U/L 3 號標準品 150μl 4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

15 U/L 2 號標準品 150μl 3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

7.5 U/L 1 號標準品 150μl 2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl

然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此

重復5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后15 分鐘以內進行。

操作程序總結:

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,

即為樣品的實際濃度。

人堿性磷酸酶(ALP)酶聯免疫分析試劑盒注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui

控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,zui好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD

大于標準品孔孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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