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ELISA試劑盒實驗如何制備抗體

 更新時間:2020-09-04 點擊量:757
  ELISA試劑盒途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物學活性抗原,通常不宜選用靜脈打針。
 
  不一樣個別對共同抗原的反應性不一樣,而且不一樣抗原發作免疫反應的能力也有強有弱,因此常常在打針抗原的一起,參與能增強抗原的抗原性物質,以影響機體發作較強的免疫反應,這種物質稱為免疫佐劑。
 
  免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合,用振蕩器混勻成乳狀,也可以在免疫前取需求量佐劑置乳缽中研磨,均勻后再邊磨邊滴參與等容積抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再繼承研磨成乳劑,滴于冰水上5~10min內*不分散停止。
 
  交叉反應率低,標明抗血清的特異性好,反之則特異性差。
 
  收集的血液置于室溫下1h支配,凝聚后,置4℃下,過夜(切勿冰凍)分出血清,離心,4000rpm,10min。
 
  取兔血有兩種方法,一是耳緣靜脈或耳動脈放血,二是頸動脈入血,也可心臟采血。加強免疫時用不*佐劑,初度免疫時皮下打針百日咳疫苗0.5ml,加強免疫時不必打針百日咳疫苗。
 
  在無菌條件,吸出血清,分裝(0.05~0.2ml),貯于-40℃以下冰箱,或凍干后儲存。
 
  取動脈或靜脈放血時,將兔放入一個特造的木匣或籠內,耳露于箱(籠)外,也可由另一人捉住兔身。
 
  避免丟掉抗原,亦可用一打針器裝抗原液,另一打針器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管聯接,然后二者往復重復抽吸,約數十分鐘后即能*乳化。
 
  每2~3周加強免疫一次。
 
  制作方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內,用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保留備用。
 
  ELISA試劑盒特異性是以交叉反應率來標明的。
 
  交叉反應率通常是用比賽抑制曲線來判定的。
 
  若用兔,用純種新西蘭兔,一組三只,兔的體重以2~3kg為宜。
 
  家兔是z常用以發作抗體的動物,因此這兒首要談論兔血的收集。
 
  頸動脈放血時,將兔仰臥,固定于兔臺,剪去頸部的毛,切開皮膚,顯露頸動脈,插管,放血。
 
  不一樣濃度的抗原和近似抗原物質分別做比賽抑制曲線,計算各自的聯絡率(B/T或B/B0),求出各清閑IC50時的濃度,按下列公式計算交叉反應率。二禮拜后,可在另一耳放血。
 
  此法可重復屢次放血。
 
  作免疫用的動物有哺乳類和禽類,首要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。
 
  在第2次加強免疫后2周,從耳緣靜脈取2~3ml血,制備血清,檢查抗體效價。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血,鼠等小動物取血可參看有關材料。
 
  剪去耳緣的毛,用少數二甲苯涂改耳廓,30s后,耳血管擴大、充血。用手輕拉耳尖,以單面剃須刀或尖的手術刀片,敏捷切開動脈或靜脈,血液即流出,每次可收集30~40ml。
 
  抗原劑量,初度劑量為300~500μg,加強免疫的劑量約為初度劑量為1/4支配。
 
  C冰箱保留。檢查合格后即以其中一打針器作打針用。
 
  佐劑除了延伸抗原在體內的存留時間,添加抗原影響效果外,更首要的是,它能影響網狀內皮系統,使介入免疫反應的免疫活性細胞增多,推進T細胞與B細胞的相互效果,然后增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的發作。
 
  ELISA試劑盒未抵達預期效價,需再進行加強免疫,直到滿足時停止。
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