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呋喃妥因代謝物檢測(cè)試劑盒各類樣本的處理方法分析

 更新時(shí)間:2019-09-12 點(diǎn)擊量:1038

呋喃妥因代謝物檢測(cè)試劑盒各類樣本的處理方法分析

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液:

配液1:0.36M亞硝基鐵qing化鉀溶液(牛奶、奶粉樣本)

11.9g亞硝基鐵qing化鉀加去離子水至100ml溶解。

配液2:1.04M硫酸鋅溶液(牛奶、奶粉樣本)

    29.8g硫酸鋅加去離子水至100ml溶解。

配液3:0.1M  K2HPO4 溶液

    稱11.4g K2HPO4?3H2O加去離子水溶解定溶至500ml。

配液4:1M  HCL

    8.6mL濃HCL加去離子水定容至100mL。

配液5:1M  NaOH溶液

    稱取4g NaOH,加去離子水定容至100ml。

配液6:復(fù)溶液

    將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

5.3 樣本前處理步驟:

5.3.1 牛奶樣本處理方法

1)取5ml樣本于離心管中,加250ul 亞硝基鐵qing化鉀溶液(配液1)振蕩混合30秒,加250ul 硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合30秒,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)取上清1.1ml,加4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;

3)在37℃過(guò)夜孵育(約16小時(shí))或50℃(超過(guò)50℃時(shí)會(huì)影響分層效果)水浴孵育3小時(shí);

4)分別加入5ml 0.1M K2HPO4 溶液,0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯,振蕩5分鐘;

5)室溫下4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘;

6)取出2.5ml的上層液到另一個(gè)離心管中,50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

7)用1ml正已烷溶解殘留物,加入1ml復(fù)溶工作液充分振蕩混合30秒;室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘;

8)去除上層正已烷,取50μl下層液用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù)為2    檢測(cè)下限:0.04ppb

5.3.2 奶粉、蛋粉樣本處理方法

1)稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中,加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;

2)在37℃過(guò)夜孵育(約16小時(shí))或50℃(超過(guò)50℃時(shí)會(huì)影響分層效果)水浴孵育3小時(shí);

3)加250ul 亞硝基鐵qing化鉀溶液(配液1)振蕩混合30秒,加250ul 硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合30秒,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

4)取全部上清到另一個(gè)離心管中,后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法,4)

5.3.3 蜂蜜、組織、腸衣、肝臟、飼料、雞蛋樣本處理方法

1)稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中,加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;

2)后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法,3)

5.3.4 熟食樣本處理方法

1)稱取1±0.05g均質(zhì)樣于50ml離心管中,加入4.5ml甲醇和0.5ml去離子水,振蕩2min,室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,去除全部液體;

2)加入5ml乙氰和5ml正己烷,振蕩2min,室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,去除全部液體;

3)在沉淀中加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;

    注:熟食的添加回收試驗(yàn)請(qǐng)?jiān)诖瞬郊尤敫邩?biāo)準(zhǔn)。

4)后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法,3)

 

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