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人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒操作步驟

 更新時間:2018-11-21 點擊量:1052
   人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒操作步驟

人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒


  1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
  2、根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
  3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
  4、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  6、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
  9、在450nm波長處測定各孔的OD值。
  人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒操作注意事項
  1、試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
  2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
  3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
  4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
  5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  6、洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
  7、底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
  8、加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
  9、按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
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